Avaliação do perfil de células natural killer circulantes no câncer de mama

Abstract

Introdução: o câncer de mama é a neoplasia maligna mais comum entre mulheres no mundo. As células NK são células da imunidade inata que possuem a capacidade de reconhecer e destruir as células tumorais e são caracterizadas pela expressão de receptores NCAM1 (CD56), FcγRIII (CD16), e ausência de CD3. A partir da presença e da intensidade desses receptores pode-se classificar as células NK em quatro subpopulações: CD56+CD16- (NK “imatura”), CD56brightCD16+ (NK “em diferenciação”), CD56dimCD16+ (NK “citotóxica”)e CD56-CD16+ (NK “reguladora”). Elas podem expressar moléculas co-receptoras como CD8 e CD4 e sua ativação é dependente do balanço dos receptores de ativação (NKG2A, NKG2D) e de inibição (KIR). O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil de subpopulações de células NK circulantes e da sua atividade funcional no câncer de mama. Métodos: foi realizado um estudo de corte transversal com componente longitudinal, translacional e prospectivo com grupo de comparação interna no período de Março de 2014 a Fevereiro de 2016. Os critérios de inclusão foram mulheres com idade acima de 18 anos com câncer de mama atendidas no IMIP e HCP e antes do tratamento cirúrgico ou quimioterápico. Os critérios de exclusão foram o uso de medicamentos imunossupressores, com diagnóstico sorológico positivo para vírus da imunodeficiência humana 1 e 2 (HIV 1 e 2), hepatites virais, vírus linfotrópico humano 1 e 2 (HTLV 1 e 2); presença de doença autoimune e estar gestante, e também com sintomas clínicos de infecção no momento da coleta do sangue periférico. Foram avaliadas 91 mulheres com CM, sendo 12 com subtipo luminal A, 31 luminal B, 22 HER2+, 26com câncer de mama triplo negativo (CMTN) e 22 controles saudáveis. A determinação dos percentuais de células NK e subpopulações, dos receptores NKG2D, NKG2A e KIR foi realizada por citometria de fluxo. Para analise da atividade funcional, células NK foram isoladas do sangue periférico pelo Dynabeads® kit (Invitrogen, Life Technologies) e realizada a dosagem de granzima A por citometria de fluxo e dascitocinas IFNγ, IL2 e IL15 por ensaio imunoenzimático, utilizando BD OptEIA Set Human kit (BD Bioscience). O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do IMIP e do HCP sob CAAE N°18418713.4.0000.5201 e CAAE N° 18418713.4.3001.205, respectivamente. Resultados: foi observada elevação dos valores relativos de NK totais nas pacientes com CM HER2+ (p=0,02), quando comparado aos controles. O CM HER2+ apresenta valores relativos elevados de células NK CD8+, quando comparados ao CMTN. Não foi observada diferença em células NK CD4+. Na análise de subpopulações de células NK, foi observada uma diminuição das células NK “imaturas” (p=0,0001) em pacientes com CM e nos subtipos luminal A (p=0,01), luminal B (p=0,0001), HER2+ (p=0,001) e CMTN (p=0,0001), quando comparado aos controles. Verificou-se diminuídos valores relativos de células NK “em diferenciação” no câncer de mama (p=0,001) e nos subtipos luminal B (p=0,01) e HER2+ (p=0,004) quando comparado aos controles saudáveis. Observaram-se níveis diminuídos de granzima A nas pacientes com subtipo luminal A. As pacientes com subtipos luminal A e B apresentaram níveis detectáveis de citocina IFN-γ produzidas por células NK, enquanto que não houve detecção dessa citocina nos subtipos CMTN e HER2+. Todos os subtipos de câncer de mama apresentaram níveis elevados de IL2 por células NK. As pacientes com subtipos HER+ e CMTN apresentaram níveis percentuais de receptores NKG2D (p=0,0005) e KIR (p=0,01) em células NK, quando comparado aos controles saudáveis. Conclusão: Conclui-se que existem alterações nas subpopulações de células NK e da sua atividade funcional no câncer de mama.