Avaliação da expressão de Programmed Cell Death 1 (PD-1) em células do sistema imune em mulheres com câncer de mama HER2+ tratadas com quimioterapia neoadjuvante e trastuzumabe

Abstract

Introdução: As células tumorais e os neoantígenos resultantes da carcinogênese desencadeiam uma resposta imune antitumoral, com participação da imunidade adaptativa e inata. No microambiente tumoral, Programmed cell death 1 (PD1), proteína transmembrana expressa na superfície de células do sistema imunológico, liga-se ao ligante Programmed death-ligand 1 (PDL1) nas células tumorais e regula negativamente a resposta imunológica. PDL1 é superexpresso em 20-50% dos cânceres de mama (CM), com maior frequência nos subtipos triplo negativo e HER2+. Já foi demonstrado o potente efeito imunomodulador das antraciclinas, paclitaxel e do trastuzumabe. Objetivo: Avaliar os componentes da resposta imune celular e a expressão do receptor PD1 nas células imunes e correlacionar com a resposta patológica em mulheres CM HER2+ que receberam quimioterapia neoadjuvante (QT neo) e trastuzumabe. Métodos: Estudo transversal, translacional, com utilização de banco de dados secundário. Recrutamento das pacientes, coletas dos materiais biológicos e análises laboratoriais foram realizadas entre 2015-2017, no Hospital de Câncer de Pernambuco (HCP) e no Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP), Recife, Pernambuco, Brasil. Incluídas 24 mulheres, com idade 18-65 anos, com diagnóstico histopatológico de carcinoma invasivo do tipo não especial (IBC-NST), subtipo HER2+, estágios II e III pela classificação TNM da American Joint Committee on Cancer (AJCC) e submetidas a QT neo associada ao trastuzumabe. Também avaliado grupo de comparação composto por 30 mulheres, com idade 18-65 anos, sem diagnóstico prévio, atual ou história familiar de CM. Coleta de sangue periférico pré-QT neo foi realizada em todas as participantes do estudo e no grupo de comparação. Segunda coleta de sangue periférico pós-QT neo foi realizada em 12 pacientes. A metodologia empregada foi a imunofenotipagem por citometria de fluxo com utilização de anticorpos monoclonais (mAbs). Resultados: A mediana de idade das participantes ao diagnóstico era 47,95 anos (interquartil 29-59). 46% eram tumores T4, 75% tinham acometimento linfonodal e 75% estágio III. Identificados baixos níveis de células T totais e de células T CD4+ e altos níveis de células T CD8+ nas pacientes HER2+, em relação ao grupo de comparação (P<0,05). Níveis elevados de células T PD1+CD8+, monócitos PD1+ e neutrófilos PD1+ e baixos níveis de células T PD1+CD4+ no CM HER2+, confrontando com grupo de comparação (P<0,05). Observados níveis elevados de células T PD1+CD4+ e baixos níveis de células T PD1+CD8+ e neutrófilos PD1+ no grupo resposta patológica completa (RPC), em comparação com resposta patológica parcial (RPP) (P<0,05). Foi encontrado aumento dos níveis percentuais de células T e células T PD1+ após QT neo, em análise pareada (P=0,032 e P=0,0010, respectivamente). Conclusão: O presente estudo mostrou alteração da resposta imune em mulheres com CM HER2+ após o tratamento com QT neoadjuvante e trastuzumabe. O nível de neutrófilos PD1+, células T PD1+CD4+ e T PD1+CD8+ foram fatores preditivos de RPC nas pacientes HER2+. Introduction: Tumor cells and neoantigens resulting from the carcinogenesis trigger an antitumor immune response, with participation of adaptive and innate immunity. In the tumor microenvironment (TME), the programmed cell death protein 1 (PD1), a transmembrane protein expressed on surface of immune cells binds to its ligand programmed death ligand 1 (PDL1) on tumor cells and negatively regulate immune response. PDL1 is overexpressed in 20-50% of breast cancer (BC), with greater frequency in triple negative breast cancer and HER2 subtypes. There is accumulating evidence that the anthracyclines, paclitaxel and trastuzumab exert a potent immunomodulatory effect on the hostˈs immune system. Objective: Evaluate both antitumor cellular immune response and PD1 expression in immune cells and correlate with pathological response in HER2+ BC patients who received neoadjuvant chemotherapy (NAC) and trastuzumab. Methods: A cross-sectional and translational study, using a secondary database. Patient recruitment, collection of biological samples and laboratory analyzes were carried out from 2015 to 2017 at the Hospital de Cancer de Pernambuco (HCP) and the Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP) Recife, Pernambuco, Brazil. The study included 24 patients, aged between 18-65 years, with histologically proven invasive carcinoma of no special type (IBC-NST), HER2-positive, stages II and III by TNM American Joint Committee on Cancer (AJCC), HER2-positive, who received NAC and trastuzumab. The study also evaluated a comparison group, consisting of 30 women, aged between 18-60 years, with no previous or current cancer diagnosis or family history of breast cancer. Peripheral blood sample was collected before NAC in all participants and on individuals of the comparison group. A second blood sample was collected after NAC in 12 patients. The methodoly used was immunophenotyping by flow cytometry using monoclonal antibodies (mAbs). Results: The median age of patients was 47.95 years (range 29-59). 46% had tumor T4, 75% of had lymph nodes involvement and 75% stage III. Were identified low levels of total T cells and CD4+ T cells and high CD8+ T cells in HER2+ patients, compared to comparison group (P<0.05). Observed high PD1+CD8+ T cells, PD1+ monocytes, and PD1+ neutrophils levels and low levels of PD1+CD4+ T cells in HER2+ patients, compared to comparison group (P<0.05). We found high levels of PD1+CD4+ T cells and low PD1+CD8+ T cells and PD1+ neutrophils levels in pathological complete response (pCR) group compared to non-pCR (P<0.05). In paired analysis, the percentage levels of T cells and PD1+ T cells were elevated after NAC (P=0.032 and P=0.0010, respectively). Conclusion: The present study reported change in the immune response in HER2+ BC after the NAC and trastuzumab treatment. The level of PD1+CD4+ T, PD1+CD8+ T and PD1+ neutrophils were predictive factors of pCR in HER2+ BC patients.